黄芩解毒散的抑菌试验

南京农业大学中兽医试验室

摘 要:测定了黄芩解毒散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌和仔猪红痢魏氏梭菌4种细菌的体外抑菌效果和最小抑菌浓度。结果表明,黄芩解毒散4种细菌高度敏感,最小抑菌浓度为15.0 mg /mL

 

大肠杆菌、沙门氏菌和魏氏梭菌等引起畜禽腹泻的主要病 [1,2]。本试验测定了黄芩解毒散对猪大肠杆菌鸡大肠杆菌鸡沙门氏菌猪魏氏梭菌体外抑菌作用和最小抑菌浓度(MIC ),旨在探讨黄芩解毒散防治畜禽腹泻的机理。

1  材料与方法

1.1 培养基

普通营养肉汤、普通营养琼脂和厌氧肉肝汤参考文献[3]制备厌氧增菌培养基,购自杭州天和微生物制剂有限公司。4 ℃保存备用。

1.2 中药及准

黄芩解毒散浸膏每毫升含生药2.404 g,由南京知新医药研发有限公司提供。白头翁散,兽药字(2006100325053,扬中牧乐药业有限公司,市售。用去离子水煎煮2次,合并煎液,纱布过滤,滤液加热浓缩至每毫升含生药1 g100 ℃灭菌30 min4 ℃保存备用。

1.3 受试菌株

猪大肠杆菌CVCC1521鸡大肠杆菌O78CMCC44439鸡沙门氏菌CVCC533;猪魏氏梭菌CVCC61, 中国兽药监察所。

1.4 抑菌效果测定

 猪大肠杆菌鸡大肠杆菌鸡沙门氏菌分别接种于普通营养肉汤,猪魏氏梭菌接种于厌氧肉肝汤,37 ℃培养猪魏氏梭菌厌氧培养)24 h复壮。按一定倍数稀释后(猪大肠杆菌1000倍、鸡大肠杆菌500倍、鸡沙门氏菌500倍、猪魏氏梭菌200倍,预试验测定),吸取150 μL于普通营养琼脂平板内,用L形涂布棒涂匀。 用直径6 mm的打孔器在平板上打孔,酒精灯加热封底,孔内注满药液,每种药液重复9孔,对照孔注满生理盐水。37 ℃培养猪魏氏梭菌厌氧培养)24 h后测量抑菌圈直径[3]。根据文献[4]介绍的标准判定各药的抑菌作用:抑菌圈直径小于10 mm为低度敏感,1015 mm为中度敏感,15 mm以上为高度敏感。

1.5 最小抑菌浓度测定

 用琼脂稀释法[5]。先将药液用营养肉汤猪魏氏梭菌用厌氧肉肝汤)倍比稀释成10种不同浓度黄芩解毒散24044.7 mg/mL白头翁散,10001.9 mg/mL。然后分别按1:9的比例加入溶化的营养琼脂中100 ℃灭菌30 min,待温度降到4050 ℃时倒入灭菌的平皿中。平板凝固后放于37 ℃的温箱中干燥1 h,用划线法接种各细菌种,37 ℃培养猪魏氏梭菌厌氧培养)24 h后观察平板上的菌落数。同时设不接种任何细菌作阴性对照和阳性对照,即不加药液但接种细菌的平板,同种处理重复4无菌落生长的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。

1.5 数据处理

t检验比较黄芩解毒散和白头翁散对各细菌抑制效果的差异。

2  结果与分析

2.1 抑菌效果

黄芩解毒散对4种细菌的平均抑菌圈直径15.318.8 mm之间,属高度敏感。对鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌和仔猪魏氏梭菌的抑菌圈直径显著大于白头翁散(P<0.05)。白头翁散4种细菌的平均抑菌圈直径6.814.0 mm之间,除对猪大肠杆菌中度敏感外,对其它3种细菌作用不明显(表1

1  中药抑菌圈直径(mmn9

 

猪大肠杆菌

鸡大肠杆菌

鸡沙门氏菌

仔猪魏氏梭菌

黄芩解毒散

17.1±0.8

15.3±0.7a

15.4±0.3a

18.8±0.6a

白头翁散

14.0±0.7

9.5±0.9b

7.2±0.4b

6.8±0.6b

生理盐水

注:同列数据上标字母不同者差异显著(P<0.05)。

 

2.3 最小抑菌浓度(MIC)

黄芩解毒散对猪大肠杆菌、鸡大肠杆菌、鸡沙门氏菌和猪魏氏梭菌的MIC15.0 mg /mL白头翁散对猪大肠杆菌鸡大肠杆菌的MIC分别为 60.1mg/mL 120.2 mg/mL,对鸡沙门氏菌和猪魏氏梭菌的MIC未测出。

3  讨论

试验结果表明,黄芩解毒散对4种供试菌株有较强的抑制作用,属高度敏感。可能其以清热解毒药为主有关,方中黄芩[6]地锦草[7]、玄参[8]、女贞子[9]金樱子[10]老鹳草[11],对大肠杆菌、痢疾杆菌和葡萄球菌等多种细菌均有较好的抑制效果

防治畜禽腹泻的关键在于 养重于防,防重于治。一旦发病用药时应首选对菌株进行药敏实验,再选择对菌株敏感的药物。本试验中黄芩解毒散对各受试菌株均有较强抑菌效果,可能是该药防治畜禽腹泻机制之一

4 结论

黄芩解毒散对猪大肠杆菌、仔猪魏氏梭菌、鸡大肠杆菌和鸡沙门氏菌高度敏感MIC15.0 mg /mL

参考文献:

[1] 华升梅书棋曾德芳猪场仔猪腹泻的病因及综合防制[J]中国畜牧兽医, 2007, 34(3): 115117

[2] 恽时锋潘震寰郑明球鸡大肠杆菌病研究进展[J]畜牧与兽医, 1998, 30(6): 277280

[3] 俞树荣微生物学和微生物学检验[M]北京人民卫生出版社, 2002. 169175

[3] 谢仲权牛树琦刘凤华天然物中草药饲料添加剂研究方法[M]北京:中国农业科技出版社200196

[4] 于文涛关云涛朴忠洙HVT国内株的分离鉴定[J]中国预防兽医学报, 2002, 24(1): 3536

[5] 陈奇中药药理研究方法学[M]. 北京人民卫生出版社, 2006, 262267

[6] 商亚珍苏丙凡黄芩根及其茎叶成分的药理学研究进展[J].承德医学院学报2005, 222):153155

[7] 朱英,孙腹娣,毛桦.地锦草总黄酮的超声提取工艺研究[J].中国中医药科技,2006, 11 6):413415

[8] 师怡,许晖,阙慧卿,等.玄参化学成分的药理作用和分析方法[J].海峡药学,200618):5861

[9] 秦红霖,高月.女贞子化学成分及药理研究进展[J].中药新药与临床药理,2007,(1):8485

[10] 邹洪涛,陈世军,杨艳.金樱子开发利用研究进展[J].林业实用技术,200,(3):2931

[11] 范红艳,郭建鹏,于海玲.老鹳草提取物对消炎痛型及利血平型胃溃疡小鼠溃疡指数的影响[J].延边大学医学报,2006124):256259


 

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